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精准制备乳鼠单细胞悬液?酶离者酶是关键!手把手教你实现90%+高活率


  做乳鼠心肌(或其他组织)单细胞实验时,你是不是总被这些问题卡住:消化后细胞团块堆积、活率跌破 70%、流式分选数据杂乱?其实实验成败的核心,藏在 “酶离者” 酶的选择与使用里 —— 选对适配乳鼠娇嫩组织的酶,再配合规范操作,就能少走 80% 的弯路!


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  “酶离者”单细胞黄金搭档


  乳鼠组织(尤其是心肌)的特点很明确:细胞娇嫩、间质成分丰富、细胞间连接紧密,普通酶解液要么 “没力气”(消化不充分,团块多),要么 “太暴力”(破坏细胞结构,活率暴跌)。而 “酶离者” 酶的配方专为乳鼠组织定制适配这些特性:


  ● 温和高效:采用复合胶原酶体系(含特定比例胶原酶 + 中性蛋白酶),既能精准拆解心肌组织的胶原纤维和细胞间连接,又不损伤细胞膜完整性,避免细胞破裂;


  ● 靶向性强:避开胰酶等强腐蚀性成分,不会破坏细胞表面标志物(如心肌细胞的 cTnT、CD31 等),后续流式检测、细胞培养不受影响;


  ● 适配性广:不仅适用于心肌,对乳鼠肝脏、肾脏、骨骼肌等组织同样友好,一瓶酶搞定多种乳鼠单细胞制备需求。


  对比普通酶解液,“酶离者” 酶的优势肉眼可见:


“酶离者” 酶的优势

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  “酶离者”酶+仪器:乳鼠单细胞制备实操指南


  结合乳鼠心肌制备流程,“酶离者” 酶的使用要紧扣 “规范操作 + 仪器协同”:


  1. 酶解液预处理(决定酶活性的关键)


  ● 保存:溶解后,按要求 - 20℃低温密封保存,避免反复冻融(会导致酶活性流失);


  2、完整操作流程(酶的使用贯穿全程)


  01.仪器准备:连接上海净信等单细胞解离仪,选择对应程序,备用;


  02.组织处理:取几只只乳鼠处死后,快速取出心脏,放入培养皿用 PBS 反复洗涤;用眼科剪将心脏剪至 1-2mm³ 的细小组织块(剪得越碎,酶解越充分)。


  03.加酶孵育:将组织块转入 50ml 消化管,加入 2ml 预热好的 “酶离者” 酶解液(按每只乳鼠心脏用量适配,可根据组织量微调);



  04.仪器运行:将消化管放入仪器通道,套上加热套,启动心脏程序,让机械解离与酶解协同作用(仪器自动控制时间,无需手动干预);


  05.终止消化:仪器运行结束后,按消化液:终止液 = 1:1的比例终止酶解(避免消化过度);


  06.后续处理:用 40μm 滤网过滤悬液,去除未消化的组织碎片;将过滤液转入离心管,离心弃上清;加入少量无菌 DPBS 轻轻打散沉淀,得到单细胞悬液;


  07.质检:显微镜下镜检,染色后上流式检测(合格标准:活率≥90%,单细胞占比≥95%)。


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  “酶离者”酶使用避坑指南


  1、解冻禁忌:一定不能用温热水解冻!很多人忽略这一点,导致酶活性直接丧失,消化效果大打折扣;


  2、避免过度消化:仪器运行时建议在旁观察,必要时中途暂停消化,查看组织块,若消化完成,可提前终止程序(乳鼠组织娇嫩,过度消化会导致细胞凋亡);


  3、减少细胞损失:清洗单细胞悬液时,避免反复离心、长时间冲洗,离心后用少量 DPBS 轻轻打散即可,防止细胞黏附流失。


  乳鼠单细胞悬液制备的核心逻辑:“酶离者” 复合酶(温和高效)+ 心脏程序(精准适配)+ 规范操作(控温、控时、控量) 。选对 “酶离者” 酶,能直接解决细胞活率低、团块多、标志物破坏等核心问题,让后续流式分选、细胞培养、测序实验一路顺畅。

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