在肌肉生物学、运动医学和再生医学等领域,获取高质量的骨骼肌单细胞悬液是开展细胞功能研究、干细胞分选和基因表达分析的关键基础。然而,骨骼肌组织因其独特的肌纤维结构和致密的细胞外基质,一直是单细胞制备中的技术难点。现在,通过优化的手动操作方案和专用的骨骼肌组织单细胞解离酶,您也可以在实验室内轻松制备出高活性的单细胞悬液!
实验流程全解析:
01. 组织前处理:取130mg小鼠骨骼肌组织,用预冷PBS清洗后,充分剪碎至糊状。这一步至关重要,能显著增加酶与组织的接触面积,提高解离效率。
02. 酶解消化:加入1.2mL酶离者-骨骼肌组织专用解离酶(货号:MJ010),置于37℃恒温振荡摇床(800rpm)消化约35分钟。在此期间,组织块将完全消失,吹打无阻力。
03. 细胞收集与纯化:
• 加入终止液终止消化
• 离心收集细胞沉淀
• 使用红细胞裂解液(货号:MJ103)去除红细胞
• PBS清洗重悬,获得纯净细胞悬液
04. 实验结果展示
• 细胞形态:透亮完整,边界清晰
• 细胞活率:≥95%(台盘蓝染色验证)
• 细胞数量:沉淀明显,悬液均匀
关键操作技巧:
• 酶解液始终保持在冰上备用,确保酶活性
• 消化过程中保持恒温振荡,促进酶与组织充分接触
• 裂红轻柔吹打,避免机械损伤
• 全程无菌操作,确保细胞可用于后续培养
试用研究方向:
• 骨骼肌干细胞功能研究
• 肌肉再生与修复机制
• 运动生理与代谢研究
• 肌肉退行性疾病模型
• 基因治疗与细胞治疗
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